连续流微通道反应器合成亮丙瑞林的实验过程

2 实验过程 Scheme 1 为实验总流程示意图． 将 Cbz 保护的氨基酸和偶联试剂混合溶解后，与 C 端片段一起泵 入微通道反应器中进行偶联反应，偶联反应结束后，用 K2CO3( 质量分数 5%) 水溶液在微通道反应器 中萃取分液除去偶联试剂及多余的 Cbz 保护氨基酸; 有机相通过设计的钯碳填料柱进行连续流动氢解 脱除 Cbz 保护基; 依次进行偶联-萃取分液-脱保护的过程，最终实现多肽的连续流动合成． 用 HPLC 跟踪监测整个反应过程． 1．2．1 苄氧羰基脯氨酰乙胺 Z-Pro-NHEt( 1) 的合成 分别将 5 g ( 20 mmol) Z-Pro-OH，3. 24 g ( 24 mmol) HOBt 和 4. 62 g( 24 mmol) EDC·HCl 溶解在 700 mL EA 中作为物料 B; 将 1. 67 g( 24 mmol) 质量 分数为 65% ～70%的乙胺水溶液溶解在 700 mL EA 中作为物料 A; 调节泵流速均为 4 mL /min，反应温 度为 70 ℃，停留时间 10 min． 反应完成后，在微通道反应器中萃取除杂，反应液流速 2 mL /min，K2CO3 ( 质量分数 5%) 水溶液流速 4 mL /min; 收集混合液于分液漏斗中静置分液，弃去水相，将有机相溶液 减压蒸干，经硅胶柱层析纯化( 乙酸乙酯/石油醚体积比 5 ∶ 2) ，得到 5. 035 g Z-Pro-NHEt( 1) 白色固体， 收率 90. 9%，m． p． 101. 3～103. 6 ℃，［α］2 D 0 = －41. 0°( c = 1. 0，AcOH) ． 1．2．2 连续流动脱除 Cbz 保护基的一般操作 将 700 mL Z-Pro-NHEt 的 EA 溶液( 流速 10 mL /min) 和 氢气( 压力控制为 0. 55 MPa) 同时通过钯碳反应柱( 16 g，质量分数 5%的 Pd /C，柱管规格 20 mm× 250 mm) ，设置反应柱背压为 0. 2 MPa，脱除保护基后反应液进入收集瓶，气体从收集瓶上端导出; 反应过程中用HPLC 监测至原料消失，即得 H-Pro-NHEt 的 EA 溶液，经减压蒸馏去除溶剂，可获得无 色清油． 1．2．3 连续流动偶联反应的一般操作 将 13. 2 g( 21. 72 mmol) Z-Arg( Boc) 2-OH·CHA 溶于 100 mL EA 中，加入质量分数为 1%的 HCl( 50 mL) 水溶液洗涤澄清后，用分液漏斗分液，保留有机相; 加入 5. 0 g( 26. 06 mmol) EDC·HCl 和 3. 5 g ( 26. 06 mmol) HOBt 配成 700 mL EA 溶液作为物料 B，将 H-Pro-NHEt 配成 700 mL EA 溶液作为物料 A; 调节两泵流速为 4 mL /min，将物料 A 和 B 同时泵入微 通道反应器中，于 70 ℃反应 10 min． 反应完成后，在微通道反应器中萃取除杂，反应液流速2 mL /min， 质量分数为 5%的 K2CO3 水溶液流速 4 mL /min，收集混合液于分液漏斗中静置分液，弃去水相，将有 机相溶液减压蒸干，经硅胶柱层析纯化( 乙酸乙酯/石油醚体积比 2 ∶ 1) ，得到化合物Z-Arg( Boc) 2-ProNHEt( 3) 白色固体，收率 90. 3%，m． p． 56. 8～60. 2 ℃，［α］2 D 0 = －34. 2°( c = 1. 0，AcOH) ． 1．2．4 连续流动合成全保护亮丙瑞林 重复以上脱保护和偶联的一般操作步骤( Scheme 2) ． 在偶联反 应中，采取 2 股物料等流速进料，对脱保护后的另一股物料进行体积定量，通过旋转蒸发除去多余溶 剂定容至 700 mL，不需蒸干溶剂，确保以既定的物料比进行下一步偶联即可; 依次偶联 9. 7 g( 21. 72 mmol) Z-Leu-OH·DCHA，5. 28 g( 19. 91 mmol) Z-D-Leu-OH，11. 0 g( 19. 91 mmol) Z-Tyr( tBu) -OH· DCHA，5. 88 g( 19. 91 mmol) Z-Ser( tBu) -OH，12. 3 g( 19. 91 mmol) Z-Trp( Boc) -OH·DCHA，9. 62 g ( 18. 1 mmol) Z-His( Trt) -OH 和 4. 76 g( 18. 1 mmol) Z-Pyr-OH; Cbz 保护氨基酸的用量降低，因为反应 过程已合成的多肽溶液会出现转移损失，避免氨基酸的过多剩余造成萃取除杂困难; 其中不含环己胺 ( CHA) 及二环己胺( DCHA) 的氨基酸不需要进行酸洗除盐操作，直接配成溶液反应，若出现溶解不充 分现象，可加入少量乙腈助溶; 合成完成后，经无水 Na2 SO4 干燥，减压蒸馏得到带保护的亮丙瑞林 25. 7 g，产率 76. 1%，HPLC 纯度 92. 4%．